达能营养中心第九届学术研讨会论文集
孙要武 孙玲娜 李永志 李省三
（齐齐哈尔医学院公共卫生系，齐齐哈尔，161042）
摘要：目的研究药食两用植物枸杞果防治大鼠脂肪肝的效果及其可能的作用机制，为进一步开展天然食用、药用植物防治脂肪肝的研究奠定基础。方法wistar雄性大鼠随机分为4组。阴性对照组饲以普通饲料，自由饮水，每天以生理盐水灌胃；模型组饲以高脂饲料，饮用15％酒精水，每天以50％酒精溶液灌胃；枸杞果液高、低剂量组在模型组的基础上，同时以枸杞果液灌胃。实验持续5周，以断头法处死大鼠并取血，以酶比色法测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇(TC)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及肝组织的TG和TC含量，并观察肝脏组织的病理变化。结果模型组血清TC高于阴性对照组（P＜005），两组的血清TG无显著差异；枸杞果液高剂量组血清TC低于模型组（P＜005），两组的血清TG无显著差异；高剂量组与低剂量组之间TG、TC无显著差异。模型组肝组织TG、TC高于阴性对照组（P＜005）；枸杞果液高剂量组肝组织TC低于模型组（P＜005），两组肝组织TG无显著差异；高剂量组与低剂量组之间TG、TC无显著差异。各组AST、ALT差异均无统计学意义。病理切片显示，枸杞果液高、低剂量组大鼠肝细胞脂肪变性较轻，炎细胞浸润轻于模型组。结论枸杞果液对酒精加高脂膳食大鼠脂肪肝有一定的防治效果，能降低大鼠血清及肝组织的TC含量，减轻大鼠肝细胞脂肪变性程度。
关键词：枸杞果；大鼠；脂肪肝
近年来国内外许多学者对脂肪肝的防治进行了一系列研究，积累了许多经验，据此前的实验和药理学研究发现［1］药食两用茄科植物枸杞具有一定的降血脂、保肝、抗脂肪肝作用，可降低血中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白浓度及肝脏甘油三酯、总胆固醇。本实验拟在采用综合因素诱发大鼠脂肪肝实验模型的同时，给予枸杞果液进行干预，以进一步探讨其防治脂肪肝的作用及其机制。
1 材料与方法
11 实验动物
健康Wistar雄性大鼠40只，体重180～220g，由齐齐哈尔医学院实验动物中心提供。
12 饲料
121 基础饲料
齐齐哈尔医学院实验动物中心提供。饲料营养成分：粗蛋白20%，粗脂肪4%，钙15%，磷1%，纤维5%，维生素A 14万IU／kg，维生素D 1500IU／kg，维生素E 120IU／kg，维生素B1 13mg／kg，维生素B2 12mg／kg，维生素B6 12mg／kg，维生素B12 0022mg／kg。
122 高脂饲料
基础饲料90%，猪油10%，人工方法制成颗粒料，每周制备1次。
13 主要仪器与试剂
131 V2550岛津紫外分光光度计、DZP102 恒温振荡器、SHAC恒温水浴箱、MR1812离心机、OLYMPUS显微镜。
132 枸杞果液枸杞果（产地宁夏，购自齐齐哈尔医学院第一附属医院药剂科）100g加自来水至500ml制成匀浆。
133 甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）试剂盒中生北控生物科技股份有限公司，批号分别为220441和180141。
134 丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒长春汇力生物技术有限公司，批号分别为2006002和 2006003。
135 猪油市售板油炼制。
14 实验方法
141 动物分组与处理
大鼠适应性饲养一周后，随机分为4组，每组10只。阴性对照组喂饲基础饲料，按1ml／100gbw体积每日1次生理盐水灌胃，自由饮用自来水；其余各组喂饲高脂饲料，按1ml／100gbw体积每日1次50％酒精灌胃,自由饮用15％酒精水；枸杞果液低剂量组同时给予枸杞果液灌胃02g／100gbw，枸杞果液高剂量组同时给予枸杞果液灌胃04g／100gbw，连续5周。
142 标本采集与制备
1421 实验结束时，各组大鼠禁食12小时，称重，断头取血于洁净干燥试管内，离心(2200rpm, 20min)分离血清，所得血清－75℃冰箱冻存，用于血液生化检测；迅速解剖，取出肝脏，冲洗后滤纸吸干，称肝湿重，在肝中叶剪下8mm×8mm×4mm大小组织块，置于80％酒精溶液中固定，用于病理切片；其余肝组织速冻后，-75℃冰箱冻存，用于肝组织匀浆生化检测。
1422 光镜标本的制作固定的肝组织块石蜡包埋，常规切片，HE染色，光镜下进行常规病理学检查。
1423 肝组织样品全脂质萃取取肝脏自然解冻，冰生理盐水冲洗、滤纸吸湿后，称取湿重200mg，加入抽提液（1∶1甲醇／氯仿混合液）2ml，用玻璃匀浆器制成10%组织匀浆，振荡抽提24h，2000rpm／min离心l0min，取上清测定肝脂质。
143 观察指标及测定方法
1431 体重及一般状况包括大鼠的食物利用率、体重、状态、皮毛、死亡等。
1432 生化指标测定分别按照试剂盒说明书操作。ALT、AST、TG、TC的测定均采用酶比色法。
1433 光镜标本由病理科医师盲法阅片。
15 数据处理
计量资料以均数±标准差(X±S)表示，用SPSS130软件包作方差分析，组间均数差异的比较用单因素方差分析（oneway ANOVA），多组间均数的两两比较，采用SNK检验，P＜005有统计学意义。
2 结果
21 对大鼠体重及一般状况的影响
实验过程中，模型组大鼠死亡3只，枸杞果液高、低剂量组各死亡2只。阴性对照组大鼠体重持续增加，其它组大鼠早期体重下降明显，随着时间的延长，体重变化趋于平稳，实验结束时，模型组及枸杞果液高、低剂量组大鼠的平均体重低于阴性对照组（P＜005）；模型组大鼠肝指数（即肝湿重／体重×100）与阴性对照组比较，无统计学差异（P＞005），枸杞果液高、低剂量组大鼠肝指数与模型组比较，亦无统计学差异（P＞005），（表1）。
各组大鼠的平均饮酒量没有统计学差异（P＞005）。模型组大鼠皮毛灰暗、凌乱、无光泽，精神不振，活动减少，食物利用率低于阴性对照组，有统计学差异（P＜005）；枸杞果液高、低剂量组大鼠皮毛光滑，有光泽，活动较多，食物利用率与模型组比较无统计学差异（P＞005），（表2）。
22 对大鼠AST、ALT的影响
模型组血清AST、ALT与阴性对照组比较，无统计学意义（P＞005）；枸杞果液高、低剂量组与模型组比较，均无统计学意义（P＞005），（表3）。
23 对大鼠血脂的影响
模型组血清TC高于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜005），两组的血清TG无显著差异（P＞005）。枸杞果液高剂量组血清TC低于模型组，差异有统计学意义（P＜005），两组血清TG无显著差异（P＞005）。枸杞果液低剂量组与模型组之间、高剂量组与低剂量组之间血清TG、TC无显著差异（P＞005），（表4）。
24 对大鼠肝组织TG、TC的影响
模型组肝组织TG、TC高于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜005）。枸杞果液高剂量组肝组织TC低于模型组，差异有统计学意义（P＜005），两组肝组织TG无显著差异（P＞005）。枸杞果液低剂量组与模型组之间、高剂量组与低剂量组之间TG、TC无显著差异（P＞005），（表5）。
25 大鼠肝脏的病理学检查
251 肉眼观察阴性对照组大鼠肝脏色泽暗红，被膜光滑，切面光洁；模型组大鼠肝脏质地较软，切面略带油腻感。枸杞果液高、低剂量组大鼠肝脏颜色红润，被膜光滑，质地接近正常肝组织。
252 光镜检查阴性对照组肝小叶结构清晰，细胞索排列整齐，肝窦正常，肝细胞无明显病变，核结构清晰；模型组肝细胞脂肪变性，肝细胞核周围有脂肪空泡，脂变细胞中胞核被挤向一侧，汇管区、肝小叶内明显的炎细胞浸润，肝小叶内可见点状坏死，小叶界限不清，细胞索紊乱。枸杞果液高、低剂量组大鼠肝细胞脂肪变性较轻，炎细胞浸润轻于模型组，肝小叶结构清晰，细胞索排列较整齐。
3 讨论
脂肪肝是由多种原因和疾病引起的肝细胞内脂质异常沉积的病理改变，并非临床上的一个独立性疾病。常见致病因素有酒精中毒、高脂饮食、药物／毒物中毒等。其发病机制复杂，至今尚未完全阐明。多种原因引起脂肪代谢障碍，肝细胞内TG合成增加或／和VLDL合成与分泌之间的不平衡，导致脂质在肝细胞中的异常堆积，是脂肪肝形成的主要原因［2］。国内关于脂肪肝的流行病学研究认为，体重指数（BMI）特别是反映内脏脂肪肥胖的腹围／臀围增加，高血压、高血脂、高血糖、嗜酒、高脂高蛋白饮食、临睡前加餐等为脂肪肝的危险因素，患者中肥胖或高脂饮食伴有饮酒史者占一定比例［3］。
本实验参考有关文献报道，以酒精（平均摄入量为1271g／kg／d）加高脂膳食，建立大鼠脂肪肝实验模型。结果显示模型组大鼠肝细胞脂肪变性，肝细胞核周围有脂肪空泡，汇管区、肝小叶内明显的炎细胞浸润，肝小叶内可见点状坏死，小叶界限不清，细胞索紊乱。
由于脂肪肝与高脂血症之间关系密切，临床上常用降脂药治疗脂肪肝。一些降脂药对脂肪肝有效，但许多降脂药反而加重肝损伤［4，5］。枸杞果为茄科植物枸杞（Lycium chinense Mill）或宁夏枸杞的成熟果实，既可入药，亦可食之。据《神农本草经》记载，枸杞子性平、味甘，具有滋补肝肾、益精明目的功效；现代药理学研究表明其含有枸杞多糖、甜菜碱、类胡萝卜素及核黄素、硫胺素等化学成分［6］，动物实验证明枸杞多糖、甜菜碱具有抗氧化、保肝、抗脂肪肝、降血脂等作用［7，8］。
本实验模拟人体食用方式，以枸杞果匀浆液对酒精加高脂膳食致大鼠脂肪肝进行干预，结果显示：大鼠的皮毛光滑、有光泽，活动多于模型组；肝内脂肪变性和炎症浸润程度与模型组比较略有减轻。
实验结果提示，枸杞果液具有降低血清和肝内胆固醇的作用，高剂量组血清和肝内TC明显低于模型组（P＜005）。胆固醇是体内重要的脂质。流行病学研究显示约有377％的脂肪肝患者血液胆固醇升高，说明血清胆固醇升高可能为脂肪肝形成的间接原因。一般认为必需脂肪酸缺乏可使磷脂合成减少，进而使TG转运困难，造成脂肪堆积，而胆固醇可与磷脂争夺必需脂肪酸从而促进脂肪肝形成。另一方面，肝脏是胆固醇合成和降解的主要部位，脂肪肝患者肝细胞降解胆固醇能力下降，也可能会导致胆固醇的升高，形成恶性循环。
文献报道，枸杞子的活性成分甜菜碱能够降低TG、VLDL和 LDLC水平，其机制可能是抑制肝内VLDL和 LDL的生物合成，或增加VLDL和 LDL的降解速度和转化为HDL的速度［8］。本次实验未能观察到枸杞果液明显降低脂肪肝大鼠血清和肝组织甘油三酯的作用，其原因有待于进一步探讨。
参考文献
［1］ 王德山，肖玉芳，许下杰枸杞子液抗实验性高血脂及肝内脂质作用的量效关系的研究实用中西医结合杂志，1998，11（3）：199.
［2］ 梁扩寰主编肝脏病学北京：人民卫生出版社，1995年，730～736.
［3］ 范建高，曾民德，王钧镕，等上海市4009名机关职员脂肪肝流行病学调查中华肝脏病杂志, 1998, 6（1）：17～19.
［4］ 范建高，曾民德主编脂肪肝上海：上海医科大学出版社，2000年，239～243.
［5］ 阎明，吕瑞娟，贾晓青，等两种调脂药对高脂血症性脂肪肝治疗的实验研究中华肝脏病杂志，2001，9（6）：355～357.
［6］ 钱彦丛，宇文萍枸杞子的化学成分及药理研究新进展中医药学报，2000，4（1）：33～35.
［7］ 边纶，沈新生，王燕容，等枸杞多糖对四氯化碳所致小鼠肝损伤修复作用的形态学研究宁夏医学杂志，1996，18（4）：196～198.
［8］ 程容懿，叶希韵，张隆，等甜菜碱预防小鼠高脂血症和脂肪肝的实验研究中国药师，2004，7(6)：411～413.