达能营养中心第十届学术研讨会论文集
詹美蓉 许榕仙
（福建医科大学营养与保健医学系，福州，350004）
摘要：目的探讨叶酸、VitB6、VitB12与2型糖尿病患者同型半胱氨酸（Hcy）水平的关系。方法应用荧光偏振免疫分析法测定99例糖尿病患者和31例正常人的Hcy，并同时测定糖尿病患者的叶酸、维生素B12。结果2型糖尿病患者的Hcy水平显著高对正常对照组（10.85±6.78，8.97±3.46，P＜0.05）；叶酸（5mg/d）干预组，VitB12(1.5mg/d)干预组及叶酸（5mg/d）与VitB12(1.5mg/d)联合干预组可降低糖尿病患者血中Hcy水平，VitB6(90mg/d)干预组则无此作用。结论叶酸干预组、VitB12干预组、叶酸联合VitB12干预组可降低糖尿病患者血中Hcy水平。
同型半胱氨酸（Hcy）是一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物，叶酸、VitB6、VitB12是蛋氨酸代谢过程中的辅酶，叶酸、VitB6、VitB12缺乏可使血清同型半胱氨酸水平增高。近年来研究表明，适当补充叶酸、VitB6、VitB12等B族维生素可以使糖尿病患者的血浆同型半胱氨酸水平降低。为此，我们通过使用叶酸、VitB6、VitB12对糖尿病患者进行干预，观察其对糖尿病患者同型半胱氨酸水平的影响。
1 研究对象与方法
1.1 研究对象
糖尿病患者均选自2005年11月～2006年11月在福建医科大学附属第一医院内分泌科住院或专科门诊的2型糖尿病患者。糖尿病诊断依据1985年WHO糖尿病诊断与分型标准。一共99例，男50例，女49例，年龄29～67岁，平均年龄54.25±11.00岁，平均病程3.75±0.66年。入选对象排除合并肝功能或甲状腺功能异常、DN以外的泌尿系疾病、慢性腹泻，乳腺癌、卵巢癌、急性淋巴细胞性白血病、1型糖尿病、心血管病变、甲状腺机能减退症和恶性贫血等；每天抽烟＞5支；近3个月内曾应用叶酸、维生素B6和维生素B12；近3个月内曾应用氨甲蝶呤、雌激素、避孕药、NO、苯妥英钠、卡马西平等。
正常对照来自医院健康体检人群，共31例。年龄、性别构成、体质指数与糖尿病组相似，空腹血糖及餐后2小时血糖均正常，其中男13例，女18例，年龄42～75岁，平均年龄55.33±11.03岁。近3个月内未曾服用叶酸、维生素B6和维生素B12。
1.2 研究方法
干预干预方法：把糖尿病患者按年龄、性别、病程分为5组。第1组不施加干预措施；第二组给予叶酸，每天5mg；第三组给予维生素B6，每天90mg；第四组给予维生素B12，每天1.5mg；第五组给予叶酸和维生素B12联合干预，叶酸5mg/天，维生素B12为1.5mg/天。各组干预时间均为8周。
检测方法：受试者过夜禁食12小时，次晨空腹采静脉血3ml，2个小时内分离血清，并置-20℃低温冰箱中保存。同型半胱氨酸测定采用荧光偏振免疫分析法，（雅培公司的AXSYM系统，试剂来自于美国雅培公司）。叶酸、维生素B12测定使用gama计数仪，采用双标记放免法，试剂盒购于天津协和医药试剂公司。测定批内变异和批间变异分别为1.07%和2.61%，空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白均使用医院检验科生化自动分析仪测定。
1.3 统计分析方法
指标检测结果以x-±s表示，正态分布资料组间比较采用独立样本T检验、方差分析，非正态分布资料组间比较采用秩和检验。上述统计均用SPSS11.5软件进行计算，以a=0.05作为检验水准。
2 结果
2.1 糖尿病组与正常对照组的基本情况
由表1可知，糖尿病各组与对照组相比，年龄（AGE）、性别（SEX）、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白（LDL）均无明显差别，收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白（HDL）均高于对照组，血浆Hcy水平亦明显高于对照组。
高Hcy血症的界定以正常对照组的Hcy均值加2倍的标准差构成，本研究中以Hcy＞15.0umol/L作为Hcy升高的标准。在本次研究中，正常对照组的高Hcy血症发生率为9.52%，糖尿病组的高Hcy血症发生率为22.40%。
表1糖尿病组与正常对照组的一般临床特征
表2糖尿病不同干预组的一般临床特征
Table 2Clinical Data of different group DM Subjects
2.2 糖尿病各干预组叶酸、维生素B12与Hcy水平比较
把糖尿病患者随机分为5组，由表2可知，这5组的年龄、病程均无明显差别。由表3可知，糖尿病无干预组及使用维生素B6干预组，血浆叶酸、Hcy、维生素B12水平在干预前后均无明显差别。叶酸干预组，干预后患者的血浆叶酸水平有所提高，同型半胱氨酸水平有所下降，并有显著性差异，维生素B12水平无差别；维生素B12干预组，干预后患者的血浆维生素B12水平上升，同型半胱氨酸水平下降，均有显著性差异，血浆叶酸水平则无明显差别；叶酸联合维生素B12干预组，干预后患者的血浆叶酸与维生素B12水平均上升，同型半胱氨酸水平下降，并均有显著性的差异。
表3糖尿病各干预组血浆叶酸、B6、B12水平
Table 3Content of Folate,VitB12，Hcy in DM Experimental Group
2.3 干预前后各组叶酸、VitB12、Hcy差值的比较
为了分析各组干预前后叶酸、VitB12、Hcy水平的变化，把各组干预前水平减去相应的干预后水平所得的差值（d）进行方差分析（表4）。结果显示：各组叶酸、VitB12、Hcy的差值都有显著性差异，进一步作两两比较(q检验)，发现未干预组、叶酸干预组叶酸、VitB12差值与其它各组有差别，未干预组、维生素B6干预疗组的Hcy差值与其它各组有差别。
表4各组叶酸、VitB12、Hcy差值比较
Table 4Difference Content of Folate,VitB12，Hcy in DM Experimental Group
3 讨论
Hcy是含硫氨基酸代谢过程中的一个重要中间产物，人体主要通过2条途径来调节其代谢。第1条是Hcy接受N一甲基四氢叶酸提供的甲基，重新生成甲硫氨酸，催化此反应的酶称为甲硫氨酸合成酶，其辅助因子是Vit B12，此反应是目前已知体内能利用N一甲基四氢叶酸的惟一反应，而体内叶酸的贮存形式是N一甲基四氢叶酸；第2条途径是Hcy可在胱硫醚B合成酶的催化下，与丝氨酸缩合生成胱硫醚，而胱硫醚B合成酶的辅助因子是磷酸吡哆醛，含有VitB6。从以上Hcy的代谢中可知VitB12、叶酸、VitB6均与Hcy的代谢有关。国内外很多研究报道认为2种B族维生素联用可显著降低Hcy的浓度。本研究通过采用3种维生素单用及联合运用，探讨其降低Hcy水平的效果。
1994年,Franken等[1]对21例高Hcy血症患者用叶酸(5mg/d)和维生素B6(250mg/d)进行干预，6周后血浆Hcy浓度全部恢复正常。Lobo等[2]将95例患者分为4组，每日分别给予叶酸0.4mg、1mg、5mg及安慰剂干预，服用叶酸的患者同时给予VitB12(0.5mg/d)和VitB6(12.5mg/d)，6周后除安慰剂组血浆Hcy浓度无明显变化外,其余3组血浆Hcy浓度均明显降低,且3组之间降低程度无显著差异。
本研究中，叶酸（5mg/d）组，VitB6(90mg/d)组，VitB12(1.5mg/d)组及叶酸（5mg/d）加VitB12(1.5mg/d)联合用药组，除了VitB6组干预后血浆Hcy浓度无明显变化外，其余3组的血浆Hcy浓度均明显降低。提示除VitB6外，其余均可降低糖尿病患者血中的Hcy水平。
Mark等[3]认为，降低空腹Hcy主要依靠叶酸，VitB12有轻度作用，而VitB6则无作用。本研究中，维生素B6干预组干预前后的叶酸、VitB12及Hcy水平均无明显变化，提示单独运用维生素B6进行干预对降低同型半胱氨酸无作用，与上述结果一致。提示以后在同型半胱血症的干预中，可不用维生素B6。Sturat[4]的meta分析亦表明，相对叶酸、VitB6、VitB12等B族维生素而言，叶酸降低血浆Hcy的能力最强，叶酸与VitB12有较弱的联合作用。在本次研究中，叶酸与VitB12联合运用虽可降低患者血浆的Hcy水平，但在联合干预中，虽然患者血浆的Hcy水平干预前后差值较大，却没有显著性的差异，可能与本研究中病例数不够大有关系。
Lobo等[2]研究提示，每日给予0.4mg叶酸的同时合用维生素B12、B6，可能会收到与服用大剂量叶酸相同效果。目前，对叶酸的用量也有小剂量的趋势。本次研究中，对各干预组的维生素使用剂量没有进一步细分，希望在以后的研究中可以更加深入。虽然VitB12和叶酸的干预对临床降低和消除高Hcy血症是迅速有效的，但是，补充维生素后的远期效果如何，停药后有无反复及能否预防由高同型半胱氨酸血症引起的血管性疾病，尚需进一步研究。
参考文献
[1] Franken DG, Boers GH, Blom HJ, et al. Treatment of mild hyperhomocysteinemia in vascular disease patients[J]. Arterioscler Thromb, 1994, 14(3):465-470.
[2] Lobo A, Naso A, Arheart K, et al. Reduction of homocysteine levels in coronary artery disease by low2 dose folic acid combined with Vitamins B6 and B12[J]. AmJ Cardiol, 1999, 83(6):821-825.
[3] Laszlo Mark,Effect of Treatment with folic acid and VitaminB6 on lipid and Homocysteine Concentration in patients with Coronary Artery Disease[J]. Nutrition, 2002,18(5):428-429.
[4] Stuart J, Bishop D, Wald NJ, et al. Folate,homocysteine,endothelial function and cardiovascular[J].The Journal of Nutritional Biochemisty, 2004,15:64-79.