达能营养中心第九届学术研讨会论文集

陈玉满陈江吴惠岭傅剑云徐彩菊
（浙江省疾病预防控制中心，杭州，310009）

摘要：目的探讨鲜皇浆对小鼠辐射损伤的保护作用。方法将160只小鼠随机分为3个试验组，剂量分别为0.80g／kg，1.78g／kg和5.00g／kg，另设一个辐射对照组，每天灌胃1次，连续30天后，各组均以60Co射线进行一次全身照射，并继续给样品，根据检测指标选择不同的照射剂量。辐照前、辐照后第3和14天进行外周血细胞计数；辐照后第3天进行骨髓有核细胞计数和骨髓细胞微核试验；辐照后第7天进行超氧化物岐化酶（SOD）活力测定；辐照后第14天测定血清溶血素。结果3个试验组小鼠外周血白细胞数、骨髓有核细胞数和血清溶血素含量明显高于辐射对照组（P＜0.05），骨髓微核率明显低于辐射对照组（P＜0.05）,血清SOD活力高于辐射对照组，但无统计学差异（P＞0.05）。结论鲜皇浆对辐射损伤具有一定的防护作用。
关键词：鲜皇浆；辐射损伤；外周白细胞；骨髓有核细胞数；微核；超氧化物歧化酶；溶血素

The Study on The AntiIrrradiating Damage
Activities of Fresh Royal Jelly
Yuman ChenJiang ChenHuiling WuJianyun FuCaiju Xu
The Center of Disease For Prevention And Control of Zhejiang Province, 310009

Abstract：Objective To evaluate the protective effects of fresh royal jelly on mice with irradiating damage induced by 60Cogammaray. Methods160 mice were divided into irradiating control group and three experiment groups. The mice of the experiment groups were be treated(P.O) fresh royal jelly with different concentration(0.80g／kg,1.78g／kg and 5.00g／kg) for 30 days. Then all animals were irradiated by 60Cogammaray, The animals of three experiment groups were be continued to be treated fresh royal jelly. The number of white blood cells(WBC) were counted before irradiating, on 3 and 14 day after irradiating, The number of karyota of femur and the frequency of micronuclei in polychromatophilic erythrocytes of bone marrow in mice were measured on 3 day after irradiating, The activities of superoxide dismutase(SOD) in serum were measured on 7 day after irradiating, and The level of Hemolysin were measured on 14 day after irradiating. ResultsCompared with the measurements in the irradiating control group, the number of WBC and karyota of femur, and the level of Hemolysin in the three experiment groups were increased significantly(P＜0.05),while the frequency of micronuclei in polychromatophilic erythrocytes of bone marrow in the three experiment groups were decreased significantly(P＜0.05),and the activities of SOD in serum in the three experiment group were increased, but no significant difference. ConclusionThe fresh royal jelly have protective effects on mice with the irradiating damage induced by gamma-ray.
Keywords： Royal jelly; Irradiating damage; WBC; The number of karyota of femur; Micronuclei; Superoxide dismutase; Hemolysin

电离辐射可以引起多种组织和器官的损伤，甚至诱发细胞突变、癌变、致死等严重后果，利用天然植物中的有效活性成份，增强机体抵抗力，防止或减轻辐射对人体健康的危害，在辐射防护中具有越来越重要的地位。
近年来从鲜皇浆中分离出多种有效活性成分，主要有黄酮类、酵素、激素类、酶类、活性酸、多糖类、十几种氨基酸和多种微量元素及多种维生素，但仍有3％左右的成分不能确定［1］。已发现鲜皇浆具有抗疲劳、抗衰老、耐缺氧、抑制肿瘤、提高免疫力和调节血糖血压等多种生物学作用，但尚未见其具有抗辐射损伤保护作用的报道［2-5］。为探讨鲜皇浆对辐射损伤的保护作用，我们采用小鼠进行抗辐射实验研究。
1 材料与方法
11 材料
纯鲜皇浆，由浙江省某保健公司提供。
12 实验动物
清洁级ICR小鼠160只，雄性、体重18—22克。由浙江省中医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(沪)2002-0010。每组40只。
13 试验方法［6］
131 剂量设置设3个试验组和1个辐射模型对照组，3个试验组给予的剂量分别为0.80g／kg、178g／kg、500g／kg。辐照模型对照组给予等量的去离子水。各组灌胃给样品1次／天，灌胃量01ml／kg体重。
132 辐照条件各组于辐照前灌胃给样品，每天一次。连续30天后，试验组与辐照模型对照组均以同一剂量γ射线全身照射一次，辐照后继续给样品。根据不同指标选择不同的照射剂量。
133 外周血白细胞计数照射剂量选择4Gy。分别于辐照前，辐照后第3天，辐照后第14天三次采末梢血10uL，适量稀释，MEK6318K血球计数仪计数。
134 小鼠骨髓有核细胞计数照射剂量选择4Gy。辐照后第3天颈椎脱臼处死小鼠，剥离出股骨，注入一定体积的Hank`s液，吸出股骨中的全部骨髓细胞，使细胞悬液充分分散。稀释后计数，计算每毫升骨髓细胞悬液中的骨髓有核细胞数。
135 小鼠骨髓细胞微核试验照射剂量选择4Gy。辐照后第3天颈椎脱臼死小白鼠，取胸骨骨髓，常规制片，固定，染色，镜检。每只动物计数1000个嗜多染红细胞中微核细胞数，微核率以千分率表示。
136 小鼠血超氧化物歧化酶（SOD）活性检测照射剂量选择6Gy。辐照后第7天，制备红细胞抽提液，用SOD试剂盒测定SOD活力（试剂盒由南京建成生物工程研究所生产提供）。
137 小鼠血清溶血素测定照射剂量选择2Gy。辐照后第14天，各组每只小鼠腹腔注射02mL2％(v／v)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。5天后，剥眼球采血，离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37℃温箱孵育3小时，观察血球凝集程度，计算抗体积数。
14 统计学方法
采用SPSS100软件进行统计分析，外周血白细胞总数、骨髓有核细胞计数、SOD活力、血清溶血素含量，方差分析检验；骨髓细胞微核率，卡方检验。
2 结果
21 鲜皇浆对小鼠体重的影响
由表1可见，各组间小鼠初重，辐照前重和辐照后3天、7天、14天与辐照模型对照组比较, 差异均无显著性(P＞0.05)。

22 鲜皇浆对小鼠外周血白细胞数的影响
由表2可见,辐照前各组白细胞总数差异无显著性（P＞0.05），辐照后第3、14天辐照模型对照组的白细胞总数与辐照前相比较，差异有显著性(P＜0.05)，说明辐射损伤模型成立。辐照后第3天、第14天各试验组白细胞总数显著高于辐照模型对照组，差异均有显著性(P＜0.05)。

23 鲜皇浆对小鼠骨髓有核细胞数的影响
由表3可见，辐照后第三天，各试验组小鼠骨髓有核细胞数均高于辐照模型对照组，差异均有显著性(P＜0.05)。

24 鲜皇浆对小鼠骨髓细胞微核率的影响
由表4可见，辐照后第3天，中，高剂量试验组与辐照模型对照组比较，能明显降低小鼠骨髓细胞微核率,差异有显著性(P＜0.05)。

25 鲜皇浆血中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响由表5可见，各试验组小鼠红细胞中SOD活性高于辐照模型对照组，但差异无显著性(P＞0.05)。

26 鲜皇浆对小鼠辐照后血清溶血素的影响
由表6可见，各试验组均能提高小鼠血清溶血素抗体积数值，与辐照模型对照组比较，差异均有显著性(P＜0.05 )。

3 讨论
电离辐射作用于机体后，可以直接作用于DNA蛋白及酶类，引起电离和化学键断裂，使分子变性和细胞结构破坏；也可以作用于机体内水分子使具发生电离和激发，产生大量的具有强氧化性能的自由基，而间接使组织细胞变性、坏死、致使代谢紊乱，引起免疫、神经和内分泌系统的调节功能障碍［7］。
骨髓是辐射高度敏感的组织，而外周WBC总数、小鼠骨髓嗜多染红细胞中微核细胞数、及骨髓有核细胞的含量是反映骨髓损伤的三个敏感指标［8-9］。本研究表明，小鼠接受4Gy的一次性全身照射后，辐射模型对照组小鼠出现外周WBC计数严重降低，骨髓有核细胞数极度下降，骨髓嗜多染红细胞中微核率明显增加的重度辐射损伤生物学效应。而鲜皇浆组动物外周血WBC数和骨髓有核细胞数明显高于辐照模型对照组，骨髓嗜多染红细胞中微核率明显低于辐照模型对照组，并且在低剂量组（相当于人推荐剂量的5倍）就已经有这种作用，而且具有一定的剂量-反应关系，表明机体如果较长时间给予剂量不高的鲜皇浆，可能具有一定的抗辐射损伤作用。鲜皇浆内所含多糖和氨基酸可能对小鼠白细胞有直接活化作用，可激发白细胞活性，增强其吞噬能力，提高机体对辐射的抵御力。另外，鲜皇浆可能能促进辐照小鼠造血功能的恢复、多功能造血干细胞的增值和分化，并防止骨髓有核细胞的损伤。
目前认为，辐射损伤的原发机理是电离辐射所产生的自由基对重要大分子的损害［10］。在辐射损伤发展过程中出现的生理学效应，生物化学损伤以及形态学改变，包括我们以往实验所证实的辐射对造血功能和微核等方面影响都可看成为自由基对机体损伤的一系列继发效应。机体在正常生理条件下也能产生少量自由基，不过很快又被体内某些酶类、抗氧化剂等清除。正是这样一个不断产生又不断被清除的动态平衡，才得以使自由基不在体内堆积，从而维持正常功能。但辐射破坏了这种平衡，它不仅使体内自由基大量产生，而且又能损伤重要的自由基清除物－SOD［11-12］。本研究表明，鲜皇浆能使辐照机体SOD活力增高，但与辐射对照组比较未见显著性差异，可能由于给予鲜皇浆的时间还不够长，鲜皇浆保存条件要求较高或其他方面原因，需要进一步研究。
目前国内尚未见有关鲜皇浆具有抗辐射作用的报道，我们的研究表明，鲜皇浆具有抗辐射作用功能，这可能与其具有免疫调节功能有关，本实验的结果也发现，各试验组用于反映免疫调节功能的指标溶血素的含量与辐射对照组相比，具有显著性差异。许多研究指出，具有免疫调节作用的生理活性物质，往往有较好的辐射防护作用［13］。
总之，在研究受照动物抗辐射效应及其机理时，除考虑鲜皇浆作为外源性调控因子对机体产生的有益造血作用外，还应特别注意到照射动物受鲜皇浆含有的生理活性成分所诱导的内源性生物抗氧化剂及其还原性物质的作用。
鲜皇浆是天然搭配的，按生物生长发育所需要的比例组合的，其矿物质的成分和含量几乎和人的血液相一致，鲜皇浆成本不是很高，来源也较广泛，本身就是可食资源，因而具有巨大的开发成抗辐射食品的价值和前景。
参考文献
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