达能营养中心第九届学术研讨会论文集

Determination of Soybeasaponin in Traditional Bean ProductsYingxin*1 2HENG Zhengchang1DUAN Guangcai2ZHANG Zunzhen1
1Huaxi School of Public Health, Sichuan University, Chengdu  610041,China;
2School of Public Health, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China.)

Abstract: ObjectiveTo determine the amount of soybeasaponin in traditional bean products and provide significance datas for the Chinese inhabitant health, it also provides essential gross datas for the prevention and treation of chronic illness. MethodsThe total soybeasaponin of soybean products is recovered by the ethyl alcohol and fast purified by the AB8 pocket adsorption resin. After vanillaperchloric acid system coloration, the content of the total Soybeasaponin is determinaed in 560nm place.Take ginseng soap glucoside Re as the standard sample and establish regression. ResultSample repetition determination  relative standard deviation RSD=2.29%, the average adds the sign returnsratio is 9915%. Measured in the bean product, the soybean soap glucoside content is in turn, Soybean flour 3540%, dried bean milk cream in tight rolls 3029%, Dried rolled bean curd 09639%, Aged bean curd 03750%, dried bean curd 02885%, bean sprouts 02256%。ConclusionAfter controlling quality, The linearity and the stability are reliable, In the soybean flour the soybean soap glucoside content is highest，In the bean sprouts the soybean soap glucoside content is lowest，in bean product maked by the homogeneous processing craft，the soybean soap glucoside content reduces along with the water content but reduces.
Keywords: soybean; soybeansaponin; Ultraviolet spectrophotometric method.

大豆皂甙（Soybea saponin，SS）是一类从豆科植物大豆中分离出的由齐墩果烯型三萜甙元与低聚糖连接而成的三萜皂甙。目前已知的大豆皂甙主要有双糖链的A类皂甙和单糖链的B类、E类以及DDMP皂甙［1］。研究表明大豆皂甙具有抗过氧化损伤、降脂减肥、抗病毒、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等生理作用［2］。大豆作为我国古老的农作物之一，已有五千年的栽培史，大豆制品是我国居民膳食的重要组成部分，也是我国居民喜闻乐见的食品之一。由于地域的因素，大豆制品种类繁多且不同地域差异较大，同时大豆制品中大豆皂甙的含量也受加工工艺的影响。有关大豆皂甙在大豆制品中含量的研究报道较少，我国食物成分表中尚缺乏食物中大豆皂甙含量的数据。对于大豆皂甙含量的检测方法，日本采用HPLC法，用大豆皂甙作为标准品，仪器条件要求及费用较高，且标准品大豆皂甙来源受限，很大程度上限制了开发应用研究的推进。目前国内尚未制定对其进行检测的统一标准方法，腾燕平等建立了一种测定大豆总皂甙含量的新方法［3-4］，采用大豆皂甙的甙元类似物作为标准品，将分光光度法用于测定大豆总皂甙的含量，方法简单，操作方便，灵敏度及重现性好。鉴于大豆皂甙对健康的有益作用，了解其在豆类及其制品中的含量，对于指导居民豆类食品的消费，促进健康具有重要意义。因此我们利用分光光度法，对传统豆制品中大豆皂甙的含量进行了检测。
1 实验材料
11 仪器与试剂722分光光度计，上海精密科学仪器有限公司制造；超声波振荡器，合肥金尼克机械制造公司制造；电子恒温水浴锅，上海一恒科技有限公司； AB-8 树脂，安徽三星树脂有限公司；人参皂甙Re（Ginseng saponin, GS）标准品（HPLC﹥98%），西安思华生物科技技术有限公司；所用甲醇、乙醇、高氯酸、冰乙酸、香草醛等试剂均为分析纯。5%香草醛溶液配制：称取5g香草醛，加冰乙酸并定容至100ml。
12 样品采集及处理老豆腐、豆腐干、豆腐皮、腐竹、黄豆芽、豆粉均购自郑州市思达超市，按照随机采样原则采取，每种豆制品取三个样品作分析。对其中的老豆腐、豆腐干、腐竹、豆腐皮、黄豆芽进行适当的物理破碎，分别称重。
2 实验过程及方法
21 标准曲线的绘制
标准溶液的配制精密称取人参皂甙Re标准品20mg，用甲醇溶解并定容至10ml，即1ml含有人参皂甙Re标准品20mg。
标准曲线的制备精确称取人参皂甙Re标准品溶液20μl、40μl、60μl、80μl、100μl、120μl（相当于人参皂甙Re 40、80、120、160、200、240 μg），于10ml的比色管中，塞紧盖子于70℃的烘箱中烘干，在每个试管中加02ml新配制的香草醛冰乙酸溶液，再加08ml的高氯酸后于60℃的恒温水浴中加热15分钟，立即置于冰浴中冷却，再分别加入5ml的冰乙酸，摇匀，用722分光光度计在560n处测定吸光度值A，将结果用SPSS100统计软件，采用线性回归进行分析得到回归方程。
22 精密度实验
连续测定人参皂甙Re标准品100μl，方法同上，共5次，得出相对标准偏差（RSD）。
23 样品溶液的配制
231 脱脂与提取精密称取各种大豆制品10g于100ml的小烧杯中，加入40ml的85%的乙酸，连同小烧杯放入超声清洗仪50℃下震荡30分钟。然后将震荡液取出过滤，过滤之后将滤液用85%的乙醇定容至50ml，再分别吸取腐竹样品溶液和豆粉样品溶液25ml至蒸发皿中，自然挥干后用85%的乙醇定容至25ml，得到各种样品的溶液。
232 纯化
AB8树脂［5］的预处理: (1)先于吸附柱内加入相当于装填树脂0405倍的85%的乙醇，将树脂投入柱中，使其液表面于03cm处浸泡24小时；(2)用2倍体积(BV) 85 %的乙醇，以2 BV／h的流速通过树脂层，并浸泡4 ~ 5小时；（3）用85%的乙醇以2 BV／h的流速通过树脂层，洗脱至流出液不呈白色混浊为主，并用去离子水以同样流速洗净乙醇；（4）以2倍体积2% HCl溶液以4 ~ 5 BV／h的流速通过树脂层，并浸泡2 ~ 4小时，然后用去离子水以同样流速洗脱至流出液的PH为中性；（5）以2倍体积2 % NaOH溶液以4 ~ 5 BV／h的流速通过树脂层，并浸泡2 ~4小时，然后用去离子水以同样流速洗脱至流出液的PH为中性；(6)用去离子水冲洗浸泡待用。
将乙醇提取过的样品溶液通过预处理的AB8树脂，先用15ml的去离子水洗脱一次，弃去水洗脱液，更换洗脱溶剂，用85%乙醇40ml进行洗脱，将洗脱液于40℃的烘箱中烘干。
233 定容将各种样品的洗脱液于40℃的烘箱中挥干，再用85%的乙醇溶液将腐竹和豆粉定容至25ml，将其它几种样品定容至50ml。
24 样品的测定
精确吸取各种样品溶液10ml，按照标准曲线的制备项进行操作，测得A值，每个样品做3个平行样。
25 加样回收率试验
精确吸取豆粉样品溶液200μl,400μl,600μl各3份，分别置于10ml的比色管中，加入精确吸取人参皂甙Re标准品80μl，按照标准曲线的制备项进行操作，测得各个平行管在560nm处的吸光值，计算回收率及相对标准偏差（RSD）。
3 结果
31 人参皂甙Re标准曲线的测定测定结果见表1。

用SPSS软件计算得回归方程为：Y=0003812X-00293 t =4584 P ＜005 相关系数r =09993
32 精密度实验结果RSD=229%，RSD小于400%，符合分析要求。
33 各种样品中大豆皂甙含量的测定各种样品中大豆皂甙的含量均为其3个平行样的平均值，结果见表2。

 附图各种豆制品中大豆皂甙的含量

34 加样回收率结果见表3。

4 讨论
41 由分析结果可见，豆粉中大豆皂甙的含量最高为3540%，腐竹次之为09369%，豆芽中大豆皂甙的含量最低为02256%，由相近工艺加工成的老豆腐，豆皮，豆腐干中大豆皂甙的含量依次降低，分别为03750%，03080%，02885%有文献报道［6］，大豆皂甙易溶于水，在漂洗，挤干的过程中极易损失，检测结果与文献报道一致［7］。
42 豆芽中大豆皂甙的含量最低，文献报道，大豆皂甙在发芽与发酵的过程中会发生水解作用，使发芽和发酵的豆制品中大豆皂甙的含量下降［8］。本次实验结果也显示，发芽与未发芽豆制品中大豆皂甙的含量存在着明显的差异。
43 以人参皂甙Re标准品，采用分光光度法测定精制纯化后的大豆皂甙样品含量，平均回收率为9915%，相对标准偏差（RSD）为191%。测定结果表明，该方法简便，操作简单，重现性好。
44 我国大豆资源丰富，大豆食品是我国居民的传统食品，近年来大豆食品的保健作用日益引起人们的高度重视，同时越来越多的证据表明，富含大豆皂甙的大豆制品可以作为功能性食品。大豆皂甙具有抗氧化损伤、降脂减肥、抗病毒、免疫调节以及抗动脉粥样硬化等生理作用。并且大豆皂甙作为豆科植物富含的一类植物化学物，是近年来受到广泛关注的具有抗肿瘤作用的非营养素成分，大量流行病学研究表明，中国居民的乳腺癌及前列腺癌发病率显著低于西方发达国家。研究也发现，亚洲各国居民豆制品的人均消费是发达国家的20～50倍。事实表明多食豆制品有益于人类健康。因此建议多食用豆类及豆类制成的食品，这对改善人民健康水平，降低癌症和冠心病的发病率和死亡率具有重要的意义。
45 中国是最早生产大豆的国家，大豆制品种类繁多，由于大豆深加工技术的进展，出现了大量的现代豆制品，如速溶豆粉、大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白、豆奶以及大豆组织蛋白等，但关于大豆制品中大豆皂甙的含量，国内尚缺乏多种食物中的检测数据和人群的摄入水平，也未制定出参考摄入量，因此迫切需要调查中国大豆及其制品中的大豆皂甙的含量，为了解大豆皂甙对中国居民健康的影响提供有意义的基础数据，还可为进行慢性病治疗预防提供直接的理论数据。
参考文献
［1］ 李艳青，王涛.大豆皂甙功能特性应用前景.粮食与油脂,2004,6: 17-19
［2］ 全吉淑,尹学哲,工藤重. 光高效液相色谱法测定大豆胚轴中大豆皂甙Ba和Bb含量. 延边大学医学学报, 2002,25（4）:235-237
［3］ 滕燕平,张玉梅,孙学斌,等. 分光光度法测定大豆总皂苷含量［J］中国食品卫生杂志,2000,4:6-10.
［4］ 黄贤校,谷克仁,周菲.紫外分光光度法测定大豆皂甙含量［J］粮食与油脂,2005,10:44-45.
［5］ 吴方晖，李文亮，边鸣镝，等. 大孔吸附树脂纯化大豆皂甙的研究［J］湖北农业科学 2004,3：94-96.
［6］ 王立刚. 大豆皂甙［J］大豆通报.2004,3：34-36.
［7］ 张玉梅,邱隽,宋丹凤, 等.哈尔滨市售几种大豆制品中大豆总皂甙含量的调查［J］中国食品卫生杂志,2001,13（5）：24-26.
［8］ 徐龙权,翟滨,田晶,等.大豆皂甙酶解的研究［J］大连轻工业学院学报,2001,20(1):37-40.