达能营养中心第九届学术研讨会论文集
苏宜香 叶艳彬 史琳娜 邹海滨
（中山大学公共卫生学院营养系，广州，510089）
本研究采用整体动物、体外细胞研究、人体随机对照临床干预等方法，系统地研究和探讨了大豆、大豆分离蛋白和大豆异黄酮提取物对防治更年期骨质疏松、改善妇女更年期综合征及血脂异常的作用及作用机制。现将主要研究结果总结如下：
1整体动物研究
用3月龄SD雌性大鼠，进行去卵巢处理，并设假手术对照组作为研究动物；分别以酪蛋白为对照，研究大豆粉为蛋白质来源的饲料对去卵巢大鼠骨量、骨密度的影响；酪蛋白为基础饲料对照，雌激素为阳性对照，研究含或去异黄酮大豆分离蛋白饲料对去卵巢大鼠骨量、骨密度的影响。
结果显示，同假手术组、异黄酮组和雌激素组比较，酪蛋白组和去异黄酮组尿钙及粪钙排出量显著升高(P＜005)；酪蛋白组和去异黄酮组钙表观吸收率显著低于假手术组、异黄酮组和雌激素组(P＜005)；假手术组、异黄酮组和雌激素组钙储留量高于酪蛋白组和去异黄酮组(P＜005)。假手术组、异黄酮组和雌激素组股骨骨钙和骨密度显著高于去异黄酮组和酪蛋白组；异黄酮组和雌激素对照组骨钙、骨密度高于酪蛋白组和去异黄酮组(P＜005)。与雌激素组比较,异黄酮组骨小梁面积百分率和骨小梁数目明显减少,骨小梁间隙明显增宽(P＜005);但与酪蛋白组和去异黄酮组比较，异黄酮组骨小梁面积百分率和骨小梁数目明显增多,骨小梁间隙明显减少(P＜005)。
表明，大豆、含有异黄酮类的大豆分离蛋白具有预防骨丢失的作用，而去除了异黄酮类的大豆分离蛋白则没有预防骨丢失的作用；大豆异黄酮类预防骨丢失的作用类似雌激素，但效果弱于雌激素。
2细胞水平研究（体外成骨细胞研究）
用大鼠不同剂量大豆异黄酮代谢血清，体外培养分离制备的新生SD大鼠成骨细胞，用对硝基酚磷酸盐法测定OB碱性磷酸酶(ALP)活性、用放免法测定成骨细胞骨钙素(BGP)含量,以酶联免疫(ELISA)法检测成骨细胞分泌细胞因子IL-6的水平。
结果显示，用3种剂量（0,50,100,250mg／d／kg BW）大豆异黄酮类提取物灌胃后分离的血清干预体外培养的大鼠成骨细胞,可使体外培养大鼠成骨细胞MTT吸光值明显增加,成骨细胞ALP活性显著升高,成骨细胞BGP分泌显著增加,而其对IL-6的分泌无明显影响。
表明，大豆异黄酮类提取物可明显促进体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化；但对骨吸收似无明显影响。因此推测，大豆异黄酮对骨质疏松预防作用的机制是促进骨细胞的增殖和分化。
3人群临床追踪研究
1）对象及方法以绝经后1～5年的妇女100人为研究对象，年龄45～60岁，骨密度值在健康成年女性骨峰值x±25s以内，除雌激素组10人外，其余90人随机单盲分为大豆异黄酮84mg／d组和126mg／d组，酪蛋白安慰剂组共3组,每组30人。
受试物为荷兰Soylife公司提供大豆异黄酮提取物粉末，按剂量设计加工成胶囊，雌激素对照组给予“利维爱”（7-炔诺酮），剂量为25mg／d。追踪期24w，规定对象每周进食大豆的量＜25g（或相当量的大豆制品），并采用普通膳食加250ml／d牛奶，加碳酸钙及维生素D（元素钙300mg／d，维生素D60IU／d），使钙的摄入量为(1000±100)mg／d，指导对象试验期间每天进行30～45min的轻度体育活动，如慢跑、快步走、爬坡、游泳、老年舞蹈等，使其体力活动度相当，并每月调查一次活动情况及饮食情况。用双能X线骨密度仪（dual energy Xrayabsorptiometry）测定试验前与结束后1w内腰椎、股骨颈和Ward’s三角区的骨密度值（BMD）。在干预前、及干预后的第3和第6月检测血脂、血清骨钙素，骨特异性碱性磷酸酶和第二次晨尿的脱氧吡啶酚。每四周要求对象记录一周的潮热、出汗次数，作一次更年期症状评分。
2）结果试验后安慰剂组腰椎骨密度较试验前显著下降（P＜005），而大豆异黄酮两组及雌激素对照组各部位骨密度试验前后无显著变化(P＞005)；协方差分析表明，试验后大豆异黄酮126mg／d组和雌激素对照组腰椎部位骨密度均值及其变化率显著高于安慰剂组（P＜005），回归分析表明大豆异黄酮对各部位的骨密度变化率均有显著的正向作用（P＜005）。在控制年龄、停经时间、膳食钙摄入量等其它因素后，异黄酮干预12周可显著降低尿中骨吸收标记物（Dpd）的含量。试验各组的潮热次数和更年期症状评分在试验期间均下降（P＜001），且大豆异黄酮类两组均显著低于安慰剂组（P＜005）；大豆异黄酮两组和雌激素组的潮热次数和评分下降率3组间无显著差异（P＞005），而安慰剂组的下降率显著低于前3组(P＜001)。大豆异黄酮两组试验中期和后期HDLC显著高于试验前（P＜005，P＜001），126mg／d组HDLC显著高于安慰剂组和84mg／d组（P＜001和P＜005），126mg／d组HDLC增长率显著高于安慰剂组（P＜001）；大豆异黄酮类两组试验中期和后期LDLC／HDLC均显著低于试验前（P＜005），126mg／d组的减少率显著高于安慰剂组（P＜001）。
3）结论大豆异黄酮84～126mg／d可能通过减缓骨质吸收来减缓绝经后妇女骨的丢失，维持骨密度的相对稳定，并具有明显的剂量—效应关系，其显效剂量是126mg／d；每天补充84mg大豆异黄酮即可改善各种更年期症状（尤其是潮热、出汗），升高绝经后妇女血清HDLC水平，降低LDLC／HDLC比值，显示其改善绝经后妇女更年期综合症的有益作用。
小结：上述研究从动物到人体、从整体到细胞层面，从大豆、大豆分离蛋白到大豆异黄酮提取物均证实大豆异黄酮可显著减缓绝经后妇女的骨质流失、改善更年期综合症。其机制与增加膳食钙吸收、减少尿钙排出以维持钙平衡、减少骨质吸收及促进成骨细胞的增殖和分化等有关。